ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРНОЙ ПРАКТИКЕ: ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ, ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ И ВИДЫ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ВЕТЕРИНАРНОЙ ПРАКТИКЕ: ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ, ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ И ВИДЫ (Часть 2)

Автор (ы): Н. А. Иванова
Организация(и): Ветеринарный центр патоморфологии и лабораторной диагностики доктора Митрохиной Н.В.
Журнал VetPharma: №3 - 2018
УДК 619: 616-006:616-091.8

Гематокрит (HCT) – соотношение объема эритроцитов и плазмы (объемная фракция эритроцитов в крови). Среднее значение для собак – 38-55 %, кошек – 28-48 %.

Повышенное значение:
- первичные и вторичные эритроцитозы (повышение количества эритроцитов);
- дегидратация (заболевания ЖКТ, сопровождающиеся профузной диарей, рвотой; диабетом);
- уменьшение объема циркулирующей плазмы (перитонит, ожоговая болезнь).

Пониженное значение:
-анемии;
- повышение объема циркулирующей плазмы(сердечная и почечная недостаточность, гиперпротеинемии);
- хронический воспалительный процесс, травмы, голодание, хроническая гиперазотемия, онкологические заболевания;
-гемоделюция
(внутривенное введение жидкостей, особенно при сниженной функциональной способности почек).

Гемоглобин (HGB) – сложный белок, кровяной пигмент. Содержится в эритроцитах, основная функция – перенос кислорода и углекислого газа, регуляция кислотно-основного состояния. Среднее значение для собак – 120-180 г/л, для кошек – 80-150 г/л.

Повышенное значение: первичные и вторичные эритроцитозы; относительный эритроцитоз при дегидратации.

Пониженное значение: различные виды анемий; острая кровопотеря (в первые сутки кровопотери из-за сгущения крови, обусловленного большой потерей жидкости, концентрация гемоглобина не соответствует картине истинной анемии); скрытые кровотечения; эндогенная интоксикация (злокачественные опухоли и их метастазы); поражение костного мозга; заболевания почек; гемоделюция (вызывает ложную анемию).

Среднее значение MCV для собак – 60-70 фл, для кошек – 43-53 фл. Повышенное значение – макроцитоз, характеризующийся: макроцитарными и мегалобластическими анемиями (B12 фолиеводефицитные); гемолитической анемией; гипотериозом; онкологическими заболеваниями; заболеваниями печени.

Нормальные значения MCV: нормоцитарные анемии (апластическая, гемолитическая, кровопотери, гемоглобинопатии); регенераторная фаза железодефицитной анемии, миелодиспластические синдромы.

Пониженные значения MCV: микроцитарные анемии (железодефицитная, сидеробластическая, талассемия); встречаются при гемолитических анемиях, гемоглобинопатиях.

Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (MCHC) для собак – 33-38%, для кошек – 32-36%. Данный показатель используют для определения типа анемий. Существует определенная формула расчета: MCHС=HGB/RBC. Высокие значения средней концентрации гемоглобина являются ошибкой аналитического этапа и не и играют диагностической роли. Причиной может быть гемолиз, хилез, присутствие телец Хейнца, агглютинация эритроцитов или неисправности гематологического анализатора.

Пониженные значения: гиперхромные железодефицитные анемии; анемии, возникающие на фоне онкологических заболеваний.

RDW-CV процентное распределение эритроцитов – среднее для собак – 16%, для кошек – 14-18 %, свидетельствует о том, насколько эритроциты различаются между собой по размерам. Повышается при анизоцитозе эритроцитов. Понижение показателя не играет диагностической роли.

Учитывая значения эритроцитарных показателей, различают 4 морфологические разновидности эритроцитов, которые лежат в основе классификации анемий.

1. Макроцитарные гипохромные (снижение MCHC; повышение MCV).

При микроскопии мазков часто наблюдается полихромазия эритроцитов и появление ядерных форм эритроцитов – нормобластов. В таких случаях рекомендовано проводить подсчет ретикулоцитов.

Ложная макроцитарная гипохромная анемия может наблюдаться у собак и кошек с персистирующей гипернатриемией.

2. Макроцитарные нормохромные анемии (повышение MCV).

Относятся к регенераторным анемиям с незначительным ретикулоцитозом. Возникают при вирусной лейкемии кошек, миелодиспластических синдромах, миелофиброзе у собак. У кошек и у пуделей макроцитоз встречается в норме при гипертиреозе. При этом анемия не выражена.

3. Нормоцитарные нормохромные анемии (MCV, MCHC в норме).

Большинство эритроцитов имеют нормальные размеры и концентрацию гемоглобина. Такое состояние, когда уровень эритроцитов в крови снижен, а MCHC и MCV находятся в пределах нормальных значений, может свидетельствовать о недостаточном эритропоэзе в костном мозге и отсутствии ретикулоцитов. Наблюдается при не регенеративной анемии. И при следующих состояниях:
· хроническое воспаление и неоплазия;
· хроническая болезнь почек;
· эндокринная недостаточность;
· аплазия и гипоплазия костного мозга;
· отравления соединениями тяжелых металлов.

4. Микроцитарные гипохромные анемии (снижение MCHC и MCV).

Наблюдаются при железодефицитной анемии у собак и кошек. Стоит учитывать, что изменение индексов в сторону снижения возникает только на стадиях выраженного дефицита железа. В таких случаях можно наблюдать изменения в морфологии большинства эритроцитов.

Наблюдаются при:
- портосистемных шунтах у собак и кошек;
- длительном лечении рекомбинантным эритропоэтином;
- применении лекарственных препаратов или агентов, ингибирующих синтез гема;
- печеночном липидозе у кошек.

В норме встречается у собак пород акита-ину и шиба-ину, при этом анемия отсутствует.

Стоит помнить, о таком явлении, как физиологическая анемия у новорожденных. Понижение эритроцитарных показателей обусловлено всасыванием белков молозива и, как следствие, повышением объема плазмы за счет осмотического эффекта. Также играют роль снижение продукции эритроцитов в раннем постнатальном периоде, укороченное время жизни эритроцитов и быстрый рост организма животного.

Несмотря на высокую точность и технологичность современных гематологических анализаторов, ручной подсчет лейкоцитарной формулы позволяет провести более детальный анализ клинико-морфологических данных, а также предотвратить возможные диагностические ошибки.

Лейкоцитарная формула (лейкограмма) – процентное соотношение различных видов лейкоцитов. Определяется методом ручного подсчета в окрашенном мазке крови с использованием световой микроскопии.

Сдвиг лейкоцитарной формулы влево – увеличение количества незрелых (палочкоядерных) нейтрофилов, появление юных клеток (метамиелоциты, миелоциты) чаще наблюдается при острых инфекционных заболеваниях, ацидозах. Может возникать на фоне физического перенапряжения и коматозных состояний.

Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо – уменьшение нормального количества палочкоядерных нейтрофилов и увеличение числа сегментоядерных нейтрофилов с гиперсегментированными ядрами. Встречается при мегалобластных анемиях, болезнях почек и печени. Может наблюдаться после переливания крови.

Возможные диагностические ошибки преаналитического этапа

Наиболее распространенной проблемой при автоматизированном подсчете является ложное занижение количества тромбоцитов. Значительно чаще ложная тромбоцитопения наблюдается у кошек. В первую очередь, это связано с морфологическими особенностями тромбоцитов у кошек, а именно, – нередко выраженным анизоцитозом с преобладанием макроформ, что нередко затрудняет автоматизированный подсчет и приводит к ложному занижению показателя общего числа тромбоцитов. Ложные снижения количества тромбоцитов могут встречаться при широком спектре нарушений, таких как аутоиммунные заболевания, вирусные и бактериальные инфекции, хронические воспалительные заболевания. Спонтанная агрегация тромбоцитов может быть проявлением таких факторов как иммунологический (антитромбоцитарные антитела), химический (антикоагулянты) и физический (температурный). Также, стоит учитывать явление EDTA-зависимой тромбоцитопении.

EDТА-зависимая тромбоцитопения является следствием взаимодействия антитромбоцитарных антител с антигенами тромбоцитов в присутствии EDТА и при воздействии низких температур. Чтобы избежать агрегации рекомендуется пропускать кровь через анализатор в промежутке 0-5 мин. или через 1 час и более после взятия крови. В промежутке 5 мин. – 1 час происходит временная агрегация тромбоцитов, что может привести к их ложному снижению в пробе крови. Непосредственно после взятия крови исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов.

Параллельно с этим может искажаться и показатель общего числа лейкоцитов. В подобных случаях при микроскопии окрашенных препаратов обнаруживаются агрегаты тромбоцитов, а также макротромбоциты, которые располагаются как единично, так и в небольших скоплениях. Для достоверного пересчета общего количества лейкоцитов используется камера Горяева.

При выявлении более 5 ядерных эритроцитов при подсчете на 100 клеток обычно проводят дополнительное вычисление скорректированного числа лейкоцитов.

Первоначально, для клинической диагностики, наибольший интерес представляют лабораторно-диагностические показатели анемии, лейкоцитоза и лейкопении.

В ряде случаев при микроскопии мазков крови выявляются клетки – предшественники эритроцитов и лейкоцитов. Чаще при подсчете лейкоцитарной формулы обнаруживаются оксифильные нормобласты – ядерные клетки, предшественники эритроцитов. Их количество указывается в расчете на 100 лейкоцитов.

В таких случаях рекомендовано проводить дополнительное исследование: подсчет ретикулоцитов с использованием специальных методов окраски. Данный вид исследования является доступным, технологически простым, и может быть исполнен в кратчайшие сроки. Целью подсчета процента ретикулоцитов является оценка эффективности эритропоэза в костном мозге.

Ретикулоциты – молодые эритроциты, которые образуются после потери нормобластами ядер, составляют около 1% от всех эритроцитов. Главной отличительной особенностью ретикулоцитов является наличие в них зернисто-нитевидной субстанции (остатки РНК, митохондрий и других клеточных органелл). Определение количества ретикулоцитов – самый последовательный способ оценки силы эритропоэза, но при интерпретации результатов стоит учитывать время начала анемии и величину ретикулоцитоза. В ветеринарной практике, как правило, у собак определяют процентное соотношение агрегатных ретикулоцитов, в то время как у кошек подсчитывают агрегатные и пунктатные ретикулоциты.

В некоторых случаях, при микроскопии мазков венозной крови, обнаруживаются клетки – предшественники лейкоцитопоэза – бластные. В норме бластные клетки присутствуют в костном мозге, их появление в периферической крови является неблагоприятным диагностическим критерием и требует комплексного гематологического обследования животного. Нередко данная цитологическая картина мазка крови сопровождается выраженной анемией и высоким лейкоцитозом. На данном этапе бластные клетки не подлежат дифференциации и, как правило, определяются как недифференцированные бластные клетки. В лейкоформуле данные клетки также указываются в процентном соотношении. Для дальнейшей диагностики и верификации диагноза у кошек, в первую очередь, рекомендовано исключить хронические вирусные инфекции – вирусную лейкемию кошек, вирусный иммунодефицит, а также вирусный перитонит), которые могут давать схожую клиническую картину. Для собак рекомендуется проведение биопсии костного мозга с целью цитологического и цитохимического исследования. У кошек биопсию костного мозга проводят реже в связи с трудоемкостью процесса. Чаще всего пункцию костного мозга проводят из подвздошного гребня. В качестве альтернативы могут быть выбраны ягодичная поверхность крыла подвздошной кости, вертлужная впадина и проксимальная часть плечевой кости. У собак мелких пород и кошек предпочтительно выбрать вертлужную впадину. У животных с сильным ожирением иногда для места пункции выбирают большеберцовый гребень.

Специальные методы исследования

В некоторых случаях, основываясь на клинико-морфологических данных, проводятся дополнительные методы исследования. Ярким примером является цитологическое исследование крови, которое назначается ветеринарным врачом в процессе комплексного гематологического обследования животного, а также при наличии объективных показаний.

Цитологическое исследование имеет преимущественные различия с клиническим анализом крови. Помимо автоматизированного подсчета клеток и микроскопии мазка крови, врач-цитолог проводит полный морфологический анализ клеточного состава крови, и, впоследствии, формирует заключение, которое играет значимую роль в установлении окончательного диагноза врачом-клиницистом.

Заключение

Гематологические исследования имеют высокую диагностическую ценность и являются важным этапом в проведении комплексных клинико-диагностических мероприятий. Однако системный подход к интерпретации результатов предполагает детальный анализ полученных данных, позволяющий избежать возможных аналитических ошибок.

Литература

1. Бажибина Е.Б., Коробов А.В., Середа С.В., Сапрыкин В.П. Методологические основы оценки клинико-морфологических показателей крови домашних животных. М.,:Аквариум, 2005.

2. Любина А. Я., Ильичева Л. П. Клинические лабораторные исследования. М., Медицина, 1984.

3. Риган Вильям Дж., Сандерс Тереза Г., Деникола Д. Атлас ветеринарной гематологии, М., Аквариум-Принт, 2015.

4. Уилард М., Твердтен Г., Торнвальд Г., Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных. М., Аквариум, 2004.

5. Мейер Д,,Харви Д. Ветеринарнаялабораторная медицина. Интерпретация и диагностика. М.,:Софион, 2007.

6. Theml H., Diem H., Haferlach T.,Color Atlas Of Hematology. Thieme, 2004.

7. Rebar A.H. Veterinaria-Hemogram interpretation for dogs and cats. Ralston Purina Company, 2000.