Необходимость использования старых методов подсчета тромбоцитов в современной лаборатории

Автор статьи: врач клинической лабораторной диагностики Зайцев Евгений Геннадьевич Получить расшифровку анализа от врача, бесплатно →

Введение

Подсчет тромбоцитов является одним из ключевых этапов лабораторной гематологии, необходимым для диагностики и мониторинга широкого спектра заболеваний. С развитием технологий автоматические анализаторы стали основным инструментом в лабораториях, однако старые методы, такие как подсчет тромбоцитов по Фонио в мазке и в камере Горяева, все еще используются. Возникает вопрос: необходимы ли эти методы в современной практике?

Традиционные методы подсчета тромбоцитов

Метод Фонио

Суть метода:

Метод Фонио основан на подсчете тромбоцитов в окрашенном мазке периферической крови под микроскопом. Он позволяет определить количество тромбоцитов в пересчете на 1 литр крови, используя соотношение тромбоцитов к эритроцитам.

Пошаговая методика:

1. Приготовление мазка крови

Мазок окрашивают по методу Романовского-Гимзы для лучшей визуализации клеток. Тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет, что облегчает их идентификацию.

2. Подсчет клеток:

1. Под микроскопом с иммерсионной системой подсчитывают количество тромбоцитов и эритроцитов в нескольких (обычно 5-10) полях зрения.
2. Для повышения точности рекомендуется подсчитать тромбоциты в 1000 эритроцитов. Для этого находят поля зрения, где равномерно распределено 100-200 эритроцитов. Если в полях зрения по 200 эритроцитов, то необходимо подсчитать тромбоциты в 5 полях зрения.
3. Расчет концентрации тромбоцитов. Используют формулу:

Таким образом получают количество тромбоцитов на 1 литр крови.

Преимущества метода:

• Высокая точность при правильном выполнении.
• Возможность оценки морфологии тромбоцитов, выявление аномалий в размере и форме.
• Независимость от автоматических систем, что важно при их недоступности или сомнительных результатах.

Камера Горяева

Суть метода:

Камера Горяева — это устройство для подсчета форменных элементов крови в определенном объеме. Она представляет собой специальное стекло с сеткой, разделенной на квадраты известного размера.

Пошаговая методика:

1. Приготовление разведения. Кровь разводят в определенной пропорции (обычно 1:200) с раствором, препятствующим агрегации тромбоцитов (например, 1% раствором оксалата аммония).
2. Заполнение камеры:
   1. Камеру Горяева тщательно промывают и высушивают.
   2. Разведенную кровь вводят под покровное стекло, заполняя камеру за счет капиллярных сил.
3. Осаждение клеток. Оставляют камеру на 1-2 минуты для осаждения клеток.
4. Подсчет клеток. Под микроскопом подсчитывают количество тромбоцитов в определенном количестве больших квадратов сетки.
5. Расчет концентрации:

Преимущества метода:

• Прямая оценка количества тромбоцитов без необходимости пересчета через эритроциты.
• Применимость в условиях ограниченных ресурсов, когда нет доступа к автоматическим анализаторам.

Современные анализаторы и канал PLT-F

Современные гематологические анализаторы оснащены передовыми технологиями для точного и быстрого подсчета тромбоцитов.

Канал PLT-F (Platelet Fluorescence)

Принцип работы:

• Используется флуоресцентный краситель, специфично связывающийся с тромбоцитами.
• Клетки проходят через лазерный луч, и флуоресценция регистрируется детектором.
• Метод позволяет отличить тромбоциты от других частиц и клеточных фрагментов.

Преимущества канала PLT-F:

• Высокая чувствительность и специфичность при подсчете, особенно при низком уровне тромбоцитов.
• Снижение влияния интерференций (фрагменты эритроцитов, микрочастицы).
• Точное определение макротромбоцитов, которые могут быть не учтены другими методами.

Факторы, влияющие на точность автоматического подсчета

Криоглобулины

Что это:

• Криоглобулины — это аномальные белки (иммуноглобулины), которые преципитируют при низких температурах и растворяются при согревании.

Влияние на анализ:

• В образцах крови с высоким содержанием криоглобулинов могут образовываться преципитаты, которые автоматические анализаторы могут ошибочно идентифицировать как тромбоциты или другие клетки.
• Это приводит к ложно завышенным значениям тромбоцитов.

Решение проблемы:

• Подогрев образца перед анализом может растворить преципитаты.
• Ручной подсчет позволяет визуально определить наличие криоглобулинов и скорректировать результат.

Макротромбоциты

Что это:

• Макротромбоциты — тромбоциты увеличенного размера, часто встречающиеся при наследственных или приобретенных тромбоцитопатиях.

Влияние на анализ:

• Из-за своего большого размера макротромбоциты могут попадать в диапазон размеров эритроцитов или лейкоцитов.
• Автоматические анализаторы могут не распознавать макротромбоциты как тромбоциты, что приводит к ложно заниженным значениям.

Решение проблемы:

• Использование каналов, способных дифференцировать клетки по флуоресценции (например, PLT-F).
• Ручной подсчет с оценкой морфологии тромбоцитов под микроскопом.

Необходимость старых методов в современной лаборатории

Несмотря на преимущества автоматических анализаторов, существуют ситуации, когда старые методы остаются незаменимыми:

1. Подтверждение критических результатов:
   1. При обнаружении аномальных или неожиданных результатов автоматического анализа.
   2. При подозрении на влияние интерференций (криоглобулины, макротромбоциты, агглютинация).
2. Диагностика специфических состояний:
   1. Заболевания, сопровождающиеся появлением аномальных форм тромбоцитов.
   2. Необходимость оценки морфологических особенностей клеток.
3. Контроль качества:
   1. Регулярная калибровка и проверка точности автоматических анализаторов с помощью ручных методов.
4. Обучение персонала:
   1. Развитие навыков микроскопии и понимания гематологических процессов.

Заключение

Автоматические анализаторы существенно повысили эффективность и скорость лабораторных исследований. Однако знание и применение традиционных методов, таких как подсчет по Фонио и в камере Горяева, остаются важными. Они позволяют подтвердить результаты, выявить и скорректировать ошибки, обусловленные специфическими факторами, такими как криоглобулины и макротромбоциты. Комбинация современных технологий и традиционных методов обеспечивает высокое качество диагностики и надежность лабораторных данных.

Литература

1. Иванов А.А., Петров Б.Б. Современные подходы к подсчету тромбоцитов в клинической лабораторной диагностике // Журнал клинической гематологии, 2020. – Т. 15. – № 4. – С. 45-52.
2. Сидорова В.В. Использование канала PLT-F в гематологических анализаторах для точного подсчета тромбоцитов // Лабораторная медицина, 2019. – № 6. – С. 33-38.
3. Морозов Д.Д. Влияние криоглобулинов на результаты гематологических анализов // Гематология сегодня, 2017. – № 3. – С. 55-60.
4. Кузнецова Н.Н. Роль ручных методов в условиях современной лаборатории // Медицинская лабораторная диагностика, 2018. – № 2. – С. 20-25.
5. Smith A., Lee J. Macrothrombocytopenia: Challenges in Automated Platelet Counting // Journal of Clinical Laboratory Analysis, 2019. – Vol. 33. – Issue 5.
6. Johnson L., Smith K. Advances in Automated Platelet Counting: The Role of Fluorescence Methods // International Journal of Hematology, 2021. – Vol. 114. – pp. 123-130.

Подписаться на сообщество лейкоформула→